RNA冲击慢病毒稳定株筛选

2022-01-10 02:35:34 来源:
分享:

小分子RNA抑止技术是一种表型地阻断某些基因序列表述的学术研究意图,在、传染传染,遗传病及其它疾病的疗程中均有广泛应用。更慢传染表征是一类来源于重一组逆转录传染的表征,由于具有可以传染非崩解期与崩解期肝细胞,容量大的外源性目地 基因序列录像,免疫反应小等不同之处,业已视作转移目地 基因序列进入类动物肝细胞的理想表征。将更慢传染表征应用于RNA抑止除此以外,可以表型抑止类动物的各类肝细胞中基因序列的表述,视作基因序列功能学术研究和基因序列疗程的有力意图。目前学术研究表明更慢传染表征能在类动物各类肝细胞不稳定的表述siRNA,长期抑止基因序列表述。为建起肝细胞模型原先基因序列疗程提供必需的学术研究意图。

生博目前为客户检验过几百种基因序列的抑止片断,并通过更慢传染得到几十种不稳定的肝细胞株。为原先学术研究基因序列疗程提供了必需依据。

BXXX1基因序列抑止不稳定的HeLa肝细胞株构建

第一一小:BXXX1抑止表征构建(表征pMagic 4.1)

siRNA设计:

MarkergeneGene IDTargetSeqGC%KD1BXXX1NM_XXX4 GCCXXXXXXXXXXXXXGA47.4 KD2BXXX1NM_XXX4GGTXXXXXXXXXXXXXTAT52.6KD3BXXX1NM_XXX4CCAXXXXXXXXXXXXXTTT52.6KD4 BXXX1NM_XXX4GCAXXXXXXXXXXXXXGAA47.4pLVT4NC TTCTCCGAACGTGTCACGT 52.6

第二一小QPCR筛靶物理

Real-time PCR检验结果显示: HeLa肝细胞中,相比之下NC一组, 四个抗癌药物中,KD2,KD4对目地基因序列BXXX1的表述的敲减成本降到80%以上,KD3对目地基因序列BXXX1的表述的敲减成本也降到50%以上,都是必需抗癌药物。

第三一小Western blot内源验证物理报告

Western Blot检验结果

电子束说明:

M 为Marker;

1 CON为正常目地空肝细胞(HeLa)电子束;

2 NC为正常目地肝细胞(HeLa),沙阴性相异传染传染的肝细胞电子束(Negative Control);

3 KD为正常目地肝细胞(HeLa),沙RNAi抗癌药物传染传染的肝细胞电子束(Knock Down)

从Western Blot结果可以看出有,KD1,KD2抗癌药物对HeLa肝细胞BXXX1的表述有敲减真实感,为必需抗癌药物。

第四一小:抑止更慢传染KD1.、相异更慢传染CMV-GFP-L.V.传染HeLa肝细胞株后检验不稳定的株。

HeLa 白光一组 White light荧光一组 Fluoresce 混和度 Day 3, 100× BlankKD1 MOI 10KD1 MOI 20CMV-GFP MOI 10CMV-GFP MOI 20

三、物理总结:

1、HeLa肝细胞传染KD1.更慢传染,MOI 10、MOI 20时疗效大,临终时肝细胞多。若只计活肝细胞,传染成本高,都至少80%。

2、HeLa肝细胞传染CMV-GFP-L.V.更慢传染,MOI 10、MOI 20时传染成本高,都至少90%。

3、传代培养后,最终检验出有HeLa- KD1 MOI 10不稳定的株,HeLa- KD1 MOI 20不稳定的株、HeLa- CMV-GFP MOI 20不稳定的株。

编辑: 陈

分享:
365整形网 整形医院哪家好 五官整容整形 整形医院咨询 整形知识 整形医生 美容整形